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昆蟲桿狀病毒表達系統項目榮獲昆山小核酸及生物醫藥產業園三創大賽三等獎！

來源：Genenode|君諾德公司發布時間：2019-06-26 Hits：9318

昆山小核酸及生物醫藥產業園三創大賽

2019年6月25日，2019?昆山小核酸及生物醫藥產業園三創大賽落下帷幕。本次大賽共征集來自中國、美國、新加坡、以色列等地各類項目近60個。經過層層選拔，“昆蟲桿狀病毒表達系統項目”最終榮獲三等獎。昆山市發展改革委副主任萬繼民、昆山陽澄湖科技園管委會副主任奚國鋒等領導出席了大賽。

項目背景介紹：

昆蟲桿狀病毒表達系統BEVS介紹

昆蟲桿狀病毒表達系統（Baculovirus Expression Vector System－BEVS）廣泛應用于科研和工業生產領域。與其他常用的重組蛋白表達系統相比，昆蟲桿狀病毒表達系統具有外源基因表達水平高、易于表達異源多聚體蛋白、安全性等優勢，表達的重組蛋白通常具有正確的翻譯后修飾和生物學活性，如二硫鍵的形成、磷酸化、糖基化等等。同時昆蟲細胞懸浮生長，容易放大培養，有利于大規模表達重組蛋白。

Genenode君諾德公司，國內獨家提供自產的第二代昆蟲桿狀病毒表達產品Super ibac，包括桿狀病毒DNA（Super ibac DNA），轉移載體(pIAT)，對照轉移載體(pIAT GFP)和Super ibac DNA Kit。相較于其他類似產品，我們價格更優惠，供貨更迅速，同時還可以提供更快速、高效、經濟的昆蟲桿狀病毒表達重組蛋白服務，自主研發生產的桿狀病毒表達試劑盒可以達到更高的重組蛋白表達水平，經驗豐富的技術人員能夠為您推薦最適合的服務，迅速解決在表達純化過程中遇到的問題。

技術原理:

Super iBac系統是一個全新的生產重組桿狀病毒的技術平臺，免去了從親代病毒中篩選重組病毒的步驟，不需要進行空斑實驗，一步法桿狀病毒蛋白表達系統，是目前最領先的桿狀病毒表達系統。

通過對桿狀病毒DNA的復制必需基因進行修改，使其不能在昆蟲細胞中正常復制，只有和對應的轉移載體同源重組，修復其復制必需基因，才能在昆蟲細胞中進行復制，只有當Super ibac DNA和攜帶目的基因的轉移載體pIAT成功同源重組后，才能在昆蟲細胞中復制存活，因此共轉染昆蟲細胞后無需任何篩選，重組率為100%，一步法轉染，簡單快速，尤其經過基因改造后，重組蛋白更穩定,蛋白生物活性更高，適合分泌蛋白，膜蛋白，毒性蛋白等難表達的蛋白。

第二代昆蟲桿狀病毒表達系統技術特點:

1.重組蛋白表達水平高（最高可達細胞總蛋白的50%），大多數為有生物功能的可溶性蛋白；

2.真核表達系統，重組蛋白生物學活性高，能同時表達多個外源基因；

3.可進行翻譯后修飾:磷酸化修飾, 形成正確折疊的二硫鍵, 進行N-和O-型糖基化修飾

4.表達人源化蛋白，昆蟲細胞中糖基化途徑克服人源糖蛋白的問題。

5.大多數昆蟲細胞系在不加血清培養基中快速生長，得到高滴度病毒和高產量重組蛋白；

6.相對于其他真核表達系統成本較低，硬件設施成本低接近于原核表達，無需CO2培養箱，無需血清培養基；

7.規模化培養簡單經濟，適合自動化生產，昆蟲細胞比哺乳動物細胞操作簡單；

8.商業化的BEVS系統讓病毒重組及蛋白表達變得更簡單；

不同蛋白表達系統的比較：

	優點	缺點
大腸桿菌	遺傳背景清楚、培養費用低、耐受能力強、抗污染能力強、穩定性好、適用范圍廣	缺乏蛋白質翻譯后加工機制; 目的蛋白常以包涵體形式釋放，產物純化困難，表達的蛋白生物活性低
哺乳動物細胞	表達的蛋白能進行翻譯后修飾并正確的折疊；能組成性或誘導性地表達目的蛋白；目的蛋白更接近天然狀態，適用于表達完整的大分子	表達量低、操作繁瑣、成本較高、不適合用于蛋白大規模生產
酵母細胞	生長繁殖速度快，培養條件普通，可大規模生產，成本相對低能夠得到折疊及修飾后的蛋白質高水平表達蛋白質可克服異源蛋白降解	大多的重組蛋白表達效率較低、過度糖基化
昆蟲桿狀病毒	高效重組：重組率100% 能同時表達多個外源基因表達產量高，超過50%蛋白可被表達可進行翻譯后的各種修飾相比如其他表達系統，該系統成本低，硬件設施要求低，無需CO2培養箱，無需血清培養基培養簡單經濟，適合自動化生產

不同桿狀病毒表達系統介紹（BEVS）

第一代表達系統: Bac-to-Bac	1.需要先在大腸桿菌系統中生產重組病毒, 篩選純化后再轉染昆蟲細胞; 2.重組效率非常低，大量篩選工作。
第一代表達系統: BacPAK6/BaculoGold	1.將桿狀病毒DNA線性化, 引入多個Bsu361限制性酶切位點; 2.Bsu361不能100%切割病毒DNA使之線性化, 重組病毒仍需要進行空斑篩選。
第一代表達系統: BaculoDirect	1.桿狀病毒DNA線性化； 2.需要利用更昔洛韋（核苷類似物）篩選重組病毒，對細胞有毒性； 3.重組效率低，需要好幾輪的擴繁。
第二代表達系統: Superibac(Genenode)	1.高效重組：重組率100%,經基因改造,僅重組病毒才能成活,無需加抗生素和任何篩選工作； 2.蛋白質量高：經基因改造,提高分泌蛋白效率，重組蛋白更穩定,蛋白生物活性更高； 3.適用于難表達的蛋白：分泌蛋白，膜蛋白，毒性蛋白；

轉染GFP基因：

轉染GFP基因 Bac-Bac

桿狀病毒宿主細胞：

細胞系	來源	應用	培養基
Sf-9	Spodopterafrugiperda Sf-9 (Pupal ovarian tissue)	重組桿狀病毒生產胞內蛋白表達空斑分析	Sf-900II/III SFM HyQ SFX
Sf-21	Spodopterafrugiperda Sf-21 (Pupal ovarian tissue)	胞內蛋白表達重組分泌蛋白	Sf-900II/III SFM ESF-921 HyQ SFX
Hi-5	Trichoplusiani Hi-5 (Ovarian cells)	重組分泌蛋白	EX-CELL 405 Express Five SFM HyQ SFX
Tri-Ex	Sf-9 derivative	胞內蛋白表達	TriEX

桿狀病毒DNA的選擇：

桿狀病毒DNA	特點
Super ibac S DNA	適合通用蛋白表達，尤其適合糖基化蛋白，分泌蛋白，膜蛋白，毒性蛋白等難表達的蛋白
Super ibac P DNA	專門開發用于表達蛋白生產病毒顆粒（VLP），也適用于胞質蛋白的表達。

產品線（咨詢電話18518676727[微信]）：

貨號	產品名稱	產品規格	目錄價	備注
200818	Super ibac S DNA	5rnx	7357.5	桿狀病毒DNA
202818	Super ibac S DNA Kit	5rnx	8982.5	試劑盒(all-in-one kit)
201801	pIAT1	3μg	812.5	轉移載體
201802	pIAT2	3μg	812.5	pIAT2轉移載體
201803	pIATGFP	25μl	812.5	pIATGFP對照轉移載體
200816	Super ibac P DNA	5rnx	6570	桿狀病毒DNA
202816	Super ibac P DNA Kit	5rnx	8195	試劑盒(all-in-one kit)

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	優點	缺點
大腸桿菌	遺傳背景清楚、培養費用低、耐受能力強、抗污染能力強、穩定性好、適用范圍廣	缺乏蛋白質翻譯后加工機制; 目的蛋白常以包涵體形式釋放，產物純化困難，表達的蛋白生物活性低
哺乳動物細胞	表達的蛋白能進行翻譯后修飾并正確的折疊；能組成性或誘導性地表達目的蛋白；目的蛋白更接近天然狀態，適用于表達完整的大分子	表達量低、操作繁瑣、成本較高、不適合用于蛋白大規模生產
酵母細胞	生長繁殖速度快，培養條件普通，可大規模生產，成本相對低能夠得到折疊及修飾后的蛋白質高水平表達蛋白質可克服異源蛋白降解	大多的重組蛋白表達效率較低、過度糖基化
昆蟲桿狀病毒	高效重組：重組率100% 能同時表達多個外源基因表達產量高，超過50%蛋白可被表達可進行翻譯后的各種修飾相比如其他表達系統，該系統成本低，硬件設施要求低，無需CO2培養箱，無需血清培養基培養簡單經濟，適合自動化生產

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